生平:
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馬日磾為著名經學家馬融的族孫（一作族子）, 年輕時已傳承了馬融的學說,
並且以才學入仕朝廷。曾任諫議大夫、光祿大夫, 與議郎盧植、議郎蔡邕、楊彪等一同在東觀典校官藏的《五經》記傳, 並參與補續《東觀漢記》。
熹平四年（公元175年）, 馬日磾與光祿大夫楊賜、五官中郎將堂溪典、議郎蔡邕、張馴、韓說、太史令單颺等人上奏, 指出經學典籍傳習久遠, 訛謬的情況日趨嚴重, 請求正訂《六經》的文字。漢靈帝同意他們的建議, 遂命楊賜等進行校勘, 並將校正過的經籍刻於石碑, 立在太學之外, 作為經籍正本（即著名的《熹平石經》）。
光和元年（公元178年）七月, 漢靈帝因此前頻頻發生災異, 下詔召馬日磾與議郎蔡邕、張華以及光祿大夫楊賜、議郎、太史令單颺至金商門, 入崇德殿, 讓中常侍曹節、王甫問他們關於災異及消除變故所應當採取的辦法。
連任三公
中平五年（公元188年）, 時為射聲校尉的馬日磾升任太尉。中平六年（189年）四月, 馬日磾被罷免。
初平二年（公元191年）七月, 時任太常的馬日磾轉任太尉。同年, 司徒王允與呂布等殺死董卓, 蔡邕因董卓被殺而歎息, 惹怒王允將他收捕下廷尉, 士大夫大多都嘗試拯救但不果, 馬日磾聽說後急忙前往對王允說：“伯喈是曠世的奇才, 清楚很多漢朝的事, 應當讓他續寫解決後邊的歷史, 讓它成為一代重要的典籍。而且他忠誠孝順的名聲一向顯著,獲罪也沒有緣由, 殺了他豈不是會喪失威望嗎？”王允說：“過去漢武帝不殺司馬遷, 讓他寫出毀謗的書, 流傳於後世。現今國家中途衰落, 政權不穩固,不能讓奸邪諂媚的臣子在幼主旁邊寫文章。這既不能增益聖上的仁德, 又令我們蒙受毀謗議論。”馬日磾離去後告訴別人說：“王允大概不能長久於世吧。有道德的人, 是國家的綱紀；寫作, 是國家的典籍。廢棄了綱紀與典籍, 難道還能長久嗎！”蔡邕便死在獄中。
出使關東
初平三年（公元192年）, 原董卓部將李傕等人攻陷長安, 殺死主政的王允並把持朝政。李傕於同年七月庚子日任命馬日磾為太傅、錄尚書事。一個月後與太僕趙岐持節安撫關東（函谷關以東）, 以向關東諸侯示好。馬日磾便順道拜授袁術左將軍、陽翟侯的官爵。
憂憤而死
馬日磾到壽春後, 曾舉薦、徵辟朱治、孫策、華歆等人為官。馬日磾多次有求於袁術, 袁術便輕侮他, 藉故問他取符節觀看, 趁機搶奪不還, 並強迫他闢命自己軍中將士十多人, 馬日磾對袁術說：“你先世諸公徵辟掾屬怎麼做？你要催我徵辟, 難道認為公府的掾屬可以靠劫迫得到嗎？”馬日磾不能索回符節, 於是要求離去, 但又被袁術阻止,更試圖強逼馬日磾任其軍師。馬日磾因為他被強搶符節而感到屈辱, 於興平元年（公元194年）在壽春憂憤嘔血而死。
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